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电泳期刊杂志是国家期刊么解读_国家出版总署查询官网(2024年12月精选)

内容来源：这家有保障所属栏目：新闻更新日期：2024-12-02

电泳期刊杂志是国家期刊么

全膜时代，WB实验成本飙升！ 𐟔 什么是全膜？很多人误以为全膜就是所有蛋白都在一张膜上跑，但实际上，全膜指的是用显影仪拍照得到的图片，未经任何裁剪、拼接等处理。一些期刊要求全膜必须包含分子大小标记物，甚至在特定情况下需要阳性和阴性对照。例如，期刊J CELL BIOCHEM就明确要求这一点。（图2，图片源于Journal of Molecular Medicine-JMM） 𐟔 为什么要全膜？ WB实验在生物学领域容易造假，有些人为了得到预期的实验结果，会直接转染过表达质粒或shRNA质粒来控制蛋白表达量。更离谱的是，有些实验室甚至直接更改蛋白名字，将A蛋白的数据结果改为B蛋白。这些“骚操作”迫使各大杂志要求提供全膜材料，以减少数据的不真实性。 𐟔 全膜的成本增加更换为全膜后，实验室的成本大幅增加。首先，抗体消耗是WB实验的主要成本之一。虽然抗体成本在逐步降低，但更换为全膜后，抗体使用量可能是之前的2-3倍，导致成本呈指数型增长。其次，在裁膜时代，一张膜可以最大化利用，可能检测多个指标。换为全膜后，一张膜只能检测一个指标。这不仅增加了时间成本，还增加了试剂成本。例如，制备凝胶、电泳、转膜等过程中所使用的试剂成本也在大幅增加。总体下来，成本可能是之前的3-5倍。最后，还有人力成本。正常一个WB实验从制备样本到完成检测，再到最后的显影结束可能花费2-3天。现在不论是使用抗体剥离液还是一张胶只进行一个抗体指标的检测，都会大幅度提高人力成本。 𐟔 总结综上所述，WB实验更换为全膜后，一次实验的成本可能是之前的5倍左右。同时，时间花费也会是之前的2-3倍，甚至更多。这不仅会增加实验室的成本，还会让研究生们花费更多时间进行实验。在研究生涯中，这无疑是一笔额外的负担。

WB实验新手必看：电泳、电转和封闭全攻略 𐟏… 电泳技巧：在WB实验中，电泳是关键的一步。建议使用66V恒压进行电泳，这样跑出来的条带会非常美观。 𐟔„ 电转操作：对于大分子量的蛋白质（超过100KD），建议使用10%的甲醇，因为甲醇浓度过高时，小分子量（小于20KD）的蛋白质容易转出。小分子量的蛋白质则可以使用20%的甲醇，如果分子量在20以下，建议使用0.22uM的PVDF膜。注意，很多期刊要求整张膜进行WB敷，因此在开始实验前要确定好目标期刊的要求。 𐟔’ 封闭过程：磷酸化指标通常需要使用BSA进行封闭，有时还需要用TAE或其他试剂调节pH。实际上，使用普通的5%BSA粉末封闭也可以得到漂亮的条带。如果目标是发表高分文章，可以尝试调整pH。普通指标可以使用5%的脱脂奶粉进行封闭。 ✂️ 切膜技巧：这一步非常关键，必须提前熟悉自己指标的分子量。熟悉分子量可以帮助你更准确地切膜，从而提高实验的准确性。

WB实验难？10招提高成功率！经常做 Western blot 的朋友们，你们是否也有过这样的困惑？每次实验都像是开奖，结果总是让人捉摸不透。十个 WB 实验，七个失败，八个丑陋，九个出问题，还有一个完全不出结果。条带失踪、背景漆黑、杂带丛生……这些问题简直让人崩溃。有时候，即使你凑齐了所有的“天时地利人和”，也不一定能得到一组完美的条带。江湖传言，一个生物学博士要跑满 1000 块胶才能顺利毕业。WB 实验本身就很难，再加上“造假”、“撤稿”、“学术不端”等丑闻，使得主流期刊对 WB 数据的要求越来越高，甚至要求作者提供原始数据和未切割的 WB 全膜条带。对于那些出道已久的“老博士”来说，WB 的“玄学”操作早就积累了一本厚厚的攻略。今天，我就来分享一些精华内容，帮助大家提高 WB 实验的成功率，让你的条带显露真身。跑胶是 WB 实验成败之母提高跑胶质量的 Tips 蛋白分子量偏高或偏低 𐟧슥糖𝦘糖𖧚„浓度与目的蛋白的浓度不对应。比如说，你用 12% 的胶跑 100KD 的蛋白，或者用 8% 的胶跑 20KD 的蛋白。蛋白质降解 𐟧𑊨›‹白质降解后很可能会在比原来位置低的地方出现主带，然后出现一些其他带。最主要的特点是所有的条带都比正常的低，并且条带模糊不清晰。所有条带连成一片无间隔 𐟌€ 最可能是上样量过多，其次是样品弥散（比如电泳长时间停止样品弥散）。溴酚蓝拖尾 𐟌篸样品溶解不好或上样前未变性完全。纵向的纹理 𐟌Š 上样样品中存在不溶性颗粒。溴酚蓝很粗 𐟌𓊦𕓧𜩨ƒ𖦵“缩效果不好，可能是浓缩胶太短或者配错。在分离胶中跑不动 𐟏ž️ Tris-Cl pH 值不对，或者忘记加 SDS。一抗加成其他抗体或二抗种属加错 𐟐�𐊥悦žœ marker 正常，其他位置没有条带，最可能是一抗加成其他抗体，或者二抗种属加错了，比如兔的加成鼠的。解决办法目的蛋白完全无信号，但同时做的内参是正常的，那么大部分情况是一抗抗体失效或用错二抗。目的蛋白和内参均无信号，则考虑是否发光液失效。如果膜上没有 marker 则为转膜失败。如果中间出现了细微条带，可能是蛋白上样量太少，或一抗浓度过低。经验之谈如图所展示的，一点信号都没有，大部分情况是因为抗体加错了。如果中间出现细微的条带，可能是蛋白上样量太少，一抗浓度过低，ECL 发光液失效。希望这些小技巧能帮助大家在 WB 实验中少走弯路，提高实验成功率！𐟒ꀀ

WB实验优化指南：提高效率与安全性 ### 凝胶制备的优化 𐟧ꊊ传统的WB实验中，凝胶制备是一个繁琐的过程。其实，你可以提前将去离子水、30% Acr-Bis、Tris、10% SDS、TEMED 等试剂混合在一起，保存在4Ⰳ避光的地方，有效期可达一个月或更长时间。这样，整个制胶过程就简化为了只需添加一种试剂。另外，为了方便上样，可以在上层胶中加入染料指示剂，形成预染胶。当然，你也可以选择使用商品化的制胶试剂盒，虽然价格稍高，但操作更简便。电泳缓冲液制备的优化 𐟌Š 电泳缓冲液的配方也有优化的空间。传统的配方在高电压下会出现蛋白质信号丢失的问题，而且不能明显缩短电泳时间。经过优化后的配方（Tris 38.1 mM、甘氨酸266.7 mM、HEPES 21.0 mM、SDS 3.5 mM、pH 8.3），可以在室温、200 V、35 min内完成电泳，并且高效分离小分子蛋白。300 V时仍能正常电泳，但电压过高容易产热，需要冰浴降温。建议配置5X的电泳液备用，因为1㗧”𕦳𓧼“冲液室温保存后容易发生絮凝。转膜液制备的优化 𐟌€ 在WB实验中，甲醇的毒性是一个大问题。其实，你可以用无水乙醇来替代甲醇配制转膜液。这样一来，所有需要用甲醇的地方都可以用乙醇替代（包括膜的活化和转膜液的配制）。为了自己的健康，做实验时，能用低毒或无毒的试剂替代时，一定要替代，不要因小失大！转印膜选择的优化 𐟓„ 转印膜的选择也会影响实验结果。0.45 ⵭ NC 膜比 0.45 ⵭ PVDF 膜更好地拦截蛋白质标记染料。对于小分子量蛋白，0.22 ⵭ PVDF膜的截留能力明显强于0.45 ⵭ PVDF膜和0.45 ⵭ NC膜。一直以来，0.22 ⵭ PVDF膜都是首选，因为它不会让小分子蛋白转过。凝胶切割的优化 ✂️ WB条带是论文造假的重灾区。每年都有无数论文因蛋白质条带而在PubPeer上受到质疑。渐渐地，一些期刊开始提倡使用未切割的凝胶。未切割的凝胶虽然增加了工作量，但可以确认相应分子量的目标蛋白并验证一抗的特异性。另外，条带太宽也不是什么好事，这样会增加非特异性条带的产生。通过这些优化方法，你可以提高WB实验的效率、安全性和准确性。希望这些建议对你的实验有所帮助！

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